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ELISA试剂盒操作的时候详细的操作步骤是什么

更新时间:2015-07-14 点击量:1473

     ELISA试剂盒操作的时候详细的操作步骤是什么?

  • 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。
  • 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl, 然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  • 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
  • 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
  • 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

             重复 5 次,拍干。

  • 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
  • 温育:操作同 3
  • 洗涤:操作同 5
  • 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.

  • 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  • 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
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