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糖原含量试剂盒简单介绍

更新时间:2018-01-10 点击量:1071

糖原含量试剂盒简单介绍

 

测定意义:

糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖,是糖的主要的储存形式之一,主要贮存在肝和肌肉
中作为备用能量,分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度,当血糖升高时可在肝
脏合成糖原,血糖降低时,肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此,肝糖原对维持血糖的
相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时,肌糖原不
能直接分解成血糖,必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡
萄糖。

测定原理:

蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原,在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、浓硫酸(不允许快递)和蒸
馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:0.1mg/mL 的葡萄糖标准液 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶, 4℃保存;

 

糖原提取:

1﹑细胞或细菌:收集 500~1000 万细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;加入 0.75mL 提
取液超声波破碎细菌或细胞(功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);转移至
10mL 试管中,95℃水浴 20min(盖紧,防止水分散失),隔 5min 振摇试管 1 次,使充分混
匀;取出试管冷却后,用蒸馏水定容到 5ml,混匀,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测。
2﹑组织:称取 0.1~0.2g 样品,加入 0.75ml 提取液充分匀浆;转移至 10ml 试管中;95℃水
浴 20min(盖紧,防止水分散失),隔 5min 振摇试管 1 次,使充分混匀;待组织全部溶解后,
取出试管冷却后,用蒸馏水定容到 5ml,混匀,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测。

糖原含量试剂盒简单介绍

步骤和加样表:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95℃。
3、试剂二工作液的配制:在试剂二中倒入 10mL 蒸馏水,缓慢倒入 40mL 浓硫酸,充分溶
解混匀后使用;用不完的试剂 4℃保存一周

糖原含量的计算:

1、按照样本质量计算
糖原(mg/g 鲜重)=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)= 0.555×(A3-A1)÷
(A2-A1)÷W
2、按照蛋白质含量计算
糖原(mg/mg prot)=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)=0.111×(A3-A1) ÷
(A2-A1) ÷Cpr 
1.11:是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数,即 111ug 糖原用蒽酮试剂显色相当于
100ug 葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色;C 标准管:标准管浓度,0.1mg/mL;V1:加入反
应体系中糖原提取液体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,5mL; Cpr:样本蛋白质浓度,
mg/mL;W:样本鲜重,g。
注意:zui低检测限为 10ng/g 鲜重或 0.1ng/ mg prot。

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