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金沙4066总区生物为您提供：一氧化氮试剂盒说明书，NO检测试剂盒。南京金沙4066总区生物供应一氧化氮检测试剂盒，咨询！
一氧化氮（NO）检测试剂盒说明书
1. 测定意义和原理
一氧化氮NO（即血管内皮舒张因子），在生物体内作为一种反应性*的自由基，兼有信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节脑血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。NO产生异常于某些疾病的发生有着密切关系。
NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐及亚硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测得NO的浓度。
NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过检测可得知NO 浓度。
2. 试剂组成及配置（96T）
试剂组成 | 保存及有效期 | 备注 |
试剂一，20mlx1瓶 | 4°C保存一年 |
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试剂二，10mlx1瓶 | 4°C保存一年 |
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试剂三，10mlx1瓶 | 4°C避光保存 | 过饱和溶液，如果结晶析出，60°C以上加热溶解*以后使用 |
试剂四，3mlx1瓶 | 4°C避光保存 |
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试剂五，3mlx1瓶 | 4°C保存 |
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2mmol/L亚硝酸钠标准液，1mlx1支 | 4°C保存 |
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显色剂的配置： 试剂三：试剂四：试剂五=2.5:1:1，现用现配，配好的显色剂放冰箱保存，颜色变得很深后不可使用
20umol/L亚硝酸钠标准液配置：取2mmol/L亚硝酸钠标准液0.1ml加双蒸水定容到10ml即为20umol/L 亚硝酸钠标准液，现用现配。
3. 操作过程
A. 前处理
血清（血浆）：取血清（血浆）原液100ul加试剂一200ul，混匀，加试剂二100ul，漩涡充分混匀后静置10分钟，3500-4000转/分钟，离心15分钟，取上清160ul操作。
组织：取10%匀浆上清300ul加试剂一200ul，混匀，加试剂二100ul，漩涡充分混匀后静置10分钟，3500-4000转/分钟，离心15分钟，取上清160ul操作。
B. 操作表：
| 空白孔 | 标准孔 | 测定孔 |
双蒸水 | 160ul |
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20umol/L亚硝酸钠标准液 |
| 160ul |
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上清液 |
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| 160ul |
显色剂 | 80ul | 80ul | 80ul |
混匀，静置15分钟，波长550nm，用酶标仪测定各孔吸光度OD值。
4. 计算公式 略
5. 计算举例
A. 取血清0.1ml，按照测定要求所示，进行操作，所得空白孔吸光度为0.0406，标准孔为0.4117，测定孔吸光度0.0795，计算如下：
NO含量= （0.0795-0.0406）÷(0.4117-0.0406)X20X4=8.38 umol/L
B. 取10%组织匀浆上清,按照测定所示要求,进行操作,所得空白孔吸光度为0.0406,标准孔吸光度为0.4117,测定孔吸光度0.0543,同时测得组织匀浆上清中总蛋白浓度为11.6574gprot/L,计算如下:
NO含量= (0.0543-0.0406) ÷(0.4117-0.0406)x20x2÷11.6574=0.127umol/gprot
6. 标准曲线的制备: 用双蒸水将2mmol/L亚硝酸钠标准溶液进行1:39, 1:79, 1:99, 1:159, 1:319, 1:639稀释.即亚硝酸钠标准液浓度依次为: 50umol/L, 25umol/L, 20umol/L, 12.5umol/L, 6.25umol/L,3.125umol/L
7. 注意事项:
A. 严格按照操作规程
B. 离心后的上层液一定要澄清,若有浑浊要再次离心
C. 溶血及浑浊血清对测定结果有影响
D. 培养液的测定参照血清(血浆)的操作及计算
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