游离脂肪酸含量试剂盒操作详情

游离脂肪酸含量试剂盒操作详情

游离脂肪酸，简称：FFA，存在于人体内的脂质，大致可以分为胆固醇、中性脂肪（三酸甘油脂）、磷脂质等3种。游离脂肪酸是中性脂肪分解成的物质。当肌肉活动所需能源--肝糖耗尽时，脂肪组织会分解中性脂肪成为游离脂肪酸来充当能源使用。所以，游离脂肪酸可说是进行持久活动所需的物质。


产品内容：

提取液：液体 100 mL×1 瓶，室温保存。

试剂一：自备。实验前一天，取一个玻璃瓶，按照正庚烷：无水甲醇：；lv仿=24:1:25 的比例配置（自备），盖紧后混匀，室温保存。

试剂二：液体 6 mL×1 瓶，室温保存。

试剂三：粉剂×2 瓶，4℃保存。临用前在试剂瓶中加入 13mL 无水乙醇，充分溶解，4℃可保存一周。

标准品：粉剂×1 瓶，10mg 棕榈酸，室温保存。临用前把试剂转移到 10 mL 玻璃瓶中，加入 7.8mLlv仿充分溶解，即为 5μmol/mL 的棕榈酸标准溶液。

产品说明：

FFA 既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。血清中 FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关。FFA 与铜离子结合形成脂肪酸铜盐，并溶于lv仿；利用铜试剂法测定铜离子含量，即可推算出游离脂肪酸含量。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、一个 25 mL 玻璃瓶、一个 15mL 玻璃瓶、正庚烷、无水甲醇、lv仿、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品中 FFA 提取：

1、血清中 FFA 测定：将所取血液，室温静置 1 h 后，于 4 ℃ 离心机 3500 rpm 离心 15min，取上层血清置于-20℃冰箱保存，待测

2、组织中 FFA 含量测定：组织用生理盐水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，称取约 0.1g，加入 1 mL 提取液，匀浆后，8000rpm，4℃离心 10min，取上清液，置冰上待测。

二、测定：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 550 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二在 37℃水浴中预热 30 min 以上。

3. 标准品的稀释：将标准品稀释成 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL。

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