人白细胞介素8(IL-8)elisa试剂盒关于标本的采集和保存

 人白细胞介素8(IL-8)elisa试剂盒关于标本的采集和保存

1、细胞来源：il-8主要由单核－巨噬细胞产生；其他如成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、肝细胞等亦可在适宜的刺激条件下产生il-8。

il-8的分子量约8kd，主要活性形式为72个氨基酸。il-8的氨基酸顺序与许多炎症因子有较高的同源性，属于同一个家族；现初步证实il-8家族（亦称pf4家族）至少有12个成员。il-8可以分成α和β亚群，α亚群的基因位于第4号染色体上，β亚群的基因位于第17号染色体上。il-8的受体也有两型：一种只能与il-8结合，而另一种还能结合其它的趋化因子；中性粒细胞和嗜碱性粒细胞表面均表达丰富的il-8受体。

2、主要生物学活性：吸引和激活中性粒细胞，曾被命名为中性粒细胞激活肽（naf）、粒细胞趋化肽（gcp）、中性粒细胞激活因子（naf）等。中性粒细胞与il-8接触后发生形态变化，定向游走到反应部位并释放一系列活性产物；这些作用可导致机体局部的炎症反应，达到杀菌和细胞损伤的目的。此外il-8对嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞也有一定作用。

标本的采集和保存

ELISA试验所用标本主要为血清，也可以用经过预处理的唾液、尿液、粪便等生物材料。患者标本可能含有干扰试验的免疫物质，导致假阳性或者假阴性的结果，干扰因素一般可分为两类，即内源性和外源性干扰因素。内源性干扰因素包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白等，避免内源性干扰因素主要通过选择合理的试剂。外源性干扰因素包括标本溶血、标本被细菌污染、储存时间过长及标本凝固等。在血液采集和运输过程时，应注意避免溶血。否则，红细胞溶解时会释放出血红蛋白，血红蛋白中的亚铁血红素具有过氧化物酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA试验测定中，可能会增加非特异性显色而出现假阳性结果。血清标本适宜在新鲜时检测，若推迟检测需将标本低温保存。一般说来，在7天内检测的血清标本，可放置于2℃~8℃保存，超过1周检测的需低温冰存。因反复冰融会使抗体效价降低，所以，对需要保存做多次抗体测定的血清标本，应少量分装并冰存。血清标本应充分离心，否则可因残留的纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果。

加样操作中，依次有3次加样，即加标本、加酶结合物、加底物。加标本一般采用手工加样或者加样器。手工加样每次必须更换吸嘴，以避免交叉感染。要掌握好并在实际操作中揣摩使用技巧，避免吸样量过多或过少。加样器在长时间使用时会因机械磨损或推动杆内附着的血痂等原因造成加样不准，因此必须定期对加样器进行维护和校准。加酶结合物和底物一般可直接滴加。每次加样时，应将所加物置于ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，注意不可溅出，不能产生气泡，加酶试剂后要用吸水纸在酶标板上轻轻擦拭吸干。加底物操作时应注意各试剂盒显色剂不能混用，添加顺序不能颠倒，不能溅出孔外。标本较多时，需要分批操作，以免加样板过多，造成加样后放入孵箱前等待时间过长(尤其是在室温较高时)。最后，在微型振荡器上震荡lmin，以保证混匀。

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