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大鼠孕酮(P)elisa试剂盒显色和比色

更新时间:2023-07-05 点击量:244

 大鼠孕酮(P)elisa试剂盒显色和比色


孕酮(progesterone,P)是21C类固醇激素,由胆固醇经孕烯醇酮通过异构酶转化而成。在妇女,卵巢中的卵泡膜细胞产生P,期间,P则主要由胎盘合体滋养细胞层分泌,故血中P水平主要与胎盘重量及血液灌注量相关。孕早期上升较慢,13周后增快,足月时达高峰。在血中,P主要与皮质类固醇结合蛋白(CBG)及白蛋白相结合,血液中绝大部分P为结合型,极少数为游离型。孕酮主要在肝脏降解,被还原成孕二醇,孕二醇再与硫酸或葡萄糖醛酸结合后经肾排出。P对调节月经周期和维持妊娠具有重要的生理作用,可促进子宫内膜分泌期的转化,为受精卵着床做准备;松弛子宫肌,降低对前列腺素和催产素的反应性;抑制输卵管节律性收缩。P还有促乳腺腺泡增生,增加能量代谢,升高基础体温,促进水钠排除的作用。P对下丘脑-垂体系统具有正、负反馈作用,可调控垂体促性腺激素的合成和分泌。排卵前小剂量孕酮协同E3诱发排卵前LH高峰出现,排卵后大剂量P对下丘脑-垂体系统则呈现负反馈作用。


显色

  显色是ELISA试验中最后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。适当提高温度,有助于加速显色。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。在定量检测中,加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。ELISA显色结果最好通过酶标仪进行,可减少实验误差,提高临界值样本的分析准确度。尽量避免肉眼直接判断结果,因为不同个体的视觉存在差异。应注意,加显色剂时,要保持显色剂不外流。加终止液时应避免产生较多气泡,否则可能使假阳性结果的出现概率增加。


比色

  比色的方法有目视法和酶标比色法2种。目视法简单明了,但对同一标本,操作者的不同有时会出现不同的结果,具有一定的主观性。比色的结果通常用光密度表达,现按规定用吸光度表达。酶标仪不应安置在阳光或强光照射下,操作时的适宜室温在15℃~30℃之间,使用前要先预热仪器15~30min,使测得结果更为准确。比色前,应先用洁净的吸水纸擦拭干净板底附着的液体,然后将板正确放在酶标比色仪的比色架上。综上所述,优质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。在实际应用过程中,操作者必须熟练掌握基本操作技能,对每个环节进行严格仔细的核查,尽量避免假阳性和假阴性反应的出现,保证检测结果真实可靠,为临床诊断和疾病防治提供可靠的理论依据。

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