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硝态氮检测试剂盒(磺胺微板法)的操作步骤
产品简介：
硝态氮是植物最主要的氮源，植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可作为土壤氮肥的指标，测定植物体内的硝态氮含量,不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。硝态氮检测试剂盒(磺胺微板法)检测原理是还原剂将硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸和萘胺结合，形成玫瑰红色的偶氮化合物，其颜色深浅与氮含量在一定范围内呈正比，以酶标仪测定 520nm 处吸光度，根据硝态氮的标准曲线即可计算出样品的硝态氮含量，主要用于测定植物组织、血清、组织样本等的硝态氮含量。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织 0.1~0.15g，清洗干净，擦干，剪碎成
1~2mm 的碎片，加入 4ml 硝态氮提取液，剧烈振荡 2~4min，静置澄清后，上清液即
为硝态氮提取液，4℃保存备用。
②血清和尿液样品：按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，4℃保存，用于
硝态氮的检测。
③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的硝态氮，可以使用硝态氮提取液或蒸馏水进
行恰当的稀释。
2、配制系列硝态氮标准溶液：取硝态氮标准(200μg/ml)用蒸馏水稀释至 20μg/ml。
3、加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免
产生气泡。如果样品中的硝态氮浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
4、硝态氮测定：剧烈振荡 1min，静置 10min，用双层滤纸过滤至新的离心管中，4000rpm
离心 5min，取上清液再次离心，取上清液加入 96 孔板中，以蒸馏水做对照调零，酶标
仪 520nm 处测定标准孔、测定孔吸光度(记为 A 标准、A 测定)。
计算：
以系列硝态氮标准(1~7 号管)浓度(μg/ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定孔的吸光-度计算出样品硝态氮的含量。根据如下公式计算具体样品中硝态氮的含量：
植物组织样品硝态氮(μg/g)=C×V/m
式中：C=从标准曲线上查得的样品的硝态氮浓度(μg/ml)
V=样品提取液的总体积(ml)，本法中为 4ml
m=样品的质量(g)
血清、尿液等样品硝态氮(μg/ml)=C×N
式中：C=从标准曲线上查得的样品的硝态氮浓度(μg/ml)
N=稀释倍数
注意事项：
1、 实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即测定，应存于 4℃。
2、 Assay Buffer 易挥发，请密闭保存。
3、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定。
4、 所测样品的浓度过高时，应用硝态氮提取液或蒸馏水稀释样品后重新测定。
5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12 个月有效。
硝态氮检测试剂盒(磺胺微板法)的操作步骤
