兔抗绵羊红细胞(溶血素)使用小贴士
利用绵羊细胞与相应抗体(溶血素)结合成的复合物,可激活血清中的补体,导致红细胞溶解,当红细胞和溶血素量一定时,在规定反应的时间内,溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%溶血(CH50)时,二者之间近似直线关系,故以50%溶血作为敏感的判断终点。以引起50%溶血所需的小补体量为一个 CH50U,可计算出待测血清中总的补体溶血活性,以 CH50U /ml表示。
产品全称:兔抗绵羊红细胞
别称: 溶血素、SRBC抗体
外观性状:液体
包装量: 1ml/瓶x10
成分:免抗绵羊红细胞血清
效价: 1:4000
存贮: -20℃可存贮1年;避光保存,避免反复冻融。
相关实验测定步骤:(仅供参考)
本试验主要反映补体经典活化途径的溶血功能,其结果与补体C1~C9各组成分的量及活性均有关。
1.试剂及配制
(1)缓冲生理盐水:
①贮存液:
Na2HPO4•12H20 2.85g
KH2PO4 0.27g (加蒸馏水至100毫升,4℃保存)
NaCl 17.00g
②应用液(缓冲液):5毫升贮存液加95毫升蒸馏水,再加10%硫酸镁0.1毫升。当日配制。12小时内使用。
(2)2%绵羊红细胞:无菌采取绵羊血液,于等量阿氏液中可保存4周。用以缓冲液
洗3次,并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。
(3)溶血素:将本品(效价1:4000),用缓冲液做1:2000倍稀释(即1ml溶血素加1999毫升缓冲液)。
(4)待测血清:新鲜血液室温放置30分钟,再4℃放置60分钟,使血块收缩。4℃离心
(3000r/min )10分钟,取上清,-20℃保存。
2.试管法操作步骤(改良 Mayer 法)
(1)致敏羊红细胞:2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素(1:2000),混匀,置37℃水浴30分钟。
(2)稀释血清:待测血清0.2ml,加缓冲液3.8ml,稀释度为1:20。
(3)配制溶血标准管:2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水,混匀,即为全溶血管。取全溶血管液2ml加缓冲液2m1,即为50%溶血管。
(4)按表所示,依次加各成分于试管中,混匀,置37℃水浴30分钟。第10管为非溶血对照。