重组链霉亲和素浓度测定方法

重组链霉亲和素浓度测定方法

产品名称：重组链霉亲和素
英文名称：Recombinant Streptavidin, r-SA
货号：B2340
规 格：1 mg，10 mg，100 mg，500 mg
纯 度：≥95%（SDS-PAGE 检测）
存储条件：-20℃保存

产品形式：冷冻干粉（5mM 磷酸钾盐缓冲液、海藻糖，pH 8.0） 

分子量：四聚体 62.4kDa，单体 15.6kDa（SDS-PAGE 检测单体约为 16.5 kDa） 

活性：≥15U/mg 蛋白（Green 改良法测定） 

浓度测定：紫外吸收法，消光系数 E(0.1% at 280 nm) =3.22 

内 毒 素：≤5EU/mg 

来 源：大肠杆菌发酵工程菌株 

相关介绍： 

链霉亲和素（Streptavidin，SA）是阿维丁链霉菌（Streptomyces avidinii）在生长过程中分泌的 一种同型四聚体蛋白。同亲和素一样，一摩尔的链霉亲和素可以结合四摩尔的生-物素，与生-物素具 有很高的亲和力。由于 SA 不含糖基且等电点接近于中性，因此 SA 在检测应用中具有比亲和素更 低的非特异性结合水平。 该制品已被广泛应用于多种生物技术领域，诸如：包被免疫检测用微孔板，制备 SA 偶联酶制 剂，SA 偶联荧光素、SA 偶联磁珠等，进而参与酶联免疫吸附和酶催化放大实验，免疫组化化学、 生物分子纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究和生物芯片被料等。 (该重组链霉亲 和素 C 端含 His-Tag 标签，pI：7.0) 

使用方法：（仅供参考） 

由于产品生产工艺中冻干环节会引入保护剂等，为减少您的实验误差，建议先通过内部检测方 法，产品中蛋白进行准确定量后，再进行后续实验，并按实际情况进行产品用量调整。建议优先选 择紫外吸收法进行定量，方法如下： 将样品从低温条件下拿出后，平衡至室温，并擦去瓶外附着的冷凝水，小心打开瓶盖，防止干 粉飞溅损失。用去离子水或缓冲液进行复溶，充分溶解后，稀释至合适浓度，小心移入比色皿中， 以去离子水或缓冲液为空白对照，测定样品在 280 nm 处的吸光值（建议吸光值控制在 0.1-1.5 区间 内），将其代入以下公式计算蛋白质浓度： C = N × A280nm E(0.1% at 280nm)式中：C：样品原液的蛋白质质量浓度（mg/mL） A280nm：蛋白质溶液在 280nm 处测得的吸光值 N：稀释倍数 E(0.1% at 280nm)：1 mg/mL 蛋白质的消光系数 例如将本产品冻干粉充分溶解并混匀后，取适量原液稀释10倍，测得其在280 nm处的吸光值为0.966， 则原液的蛋白浓度为 10×0.966/3.22=3 mg/mL。 

注意事项： 

1. 链霉亲和素冻干粉易溶于水，溶解性可达 10 mg / mL 或更高； 

2. 建议使用纯水溶解； 

3. 如有未溶解物质，建议延长复溶时间。也可以通过离心或其他方式除去不溶物后，再用于后 续实验，不会对总蛋白产生很大的影响。 

4. 考虑到蛋白质特殊性，冻干粉建议现用现配，溶解后应避免反复冻融，如需多次使用，建议 按需分装后冻存（-20℃）；避免在 4℃下长期存放。