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重组链霉亲和素浓度测定方法

更新时间:2024-05-23 点击量:109

重组链霉亲和素浓度测定方法


产品名称:重组链霉亲和素
英文名称:Recombinant Streptavidin, r-SA
货号:B2340
规 格:1 mg,10 mg,100 mg,500 mg
纯 度:≥95%(SDS-PAGE 检测)
存储条件:-20℃保存

产品形式:冷冻干粉(5mM 磷酸钾盐缓冲液、海藻糖,pH 8.0) 

分子量:四聚体 62.4kDa,单体 15.6kDaSDS-PAGE 检测单体约为 16.5 kDa) 

活性:≥15U/mg 蛋白(Green 改良法测定) 

浓度测定:紫外吸收法,消光系数 E(0.1% at 280 nm) =3.22 

内 毒 素:≤5EU/mg 

 

来 源:大肠杆菌发酵工程菌株 


相关介绍: 

链霉亲和素(StreptavidinSA)是阿维丁链霉菌(Streptomyces avidinii)在生长过程中分泌的 一种同型四聚体蛋白。同亲和素一样,一摩尔的链霉亲和素可以结合四摩尔的生-物素,与生-物素具 有很高的亲和力。由于 SA 不含糖基且等电点接近于中性,因此 SA 在检测应用中具有比亲和素更 低的非特异性结合水平。 该制品已被广泛应用于多种生物技术领域,诸如:包被免疫检测用微孔板,制备 SA 偶联酶制 剂,SA 偶联荧光素、SA 偶联磁珠等,进而参与酶联免疫吸附和酶催化放大实验,免疫组化化学、 生物分子纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究和生物芯片被料等。 (该重组链霉亲 和素 端含 His-Tag 标签,pI7.0) 

使用方法:(仅供参考) 

由于产品生产工艺中冻干环节会引入保护剂等,为减少您的实验误差,建议先通过内部检测方 法,产品中蛋白进行准确定量后,再进行后续实验,并按实际情况进行产品用量调整。建议优先选 择紫外吸收法进行定量,方法如下: 将样品从低温条件下拿出后,平衡至室温,并擦去瓶外附着的冷凝水,小心打开瓶盖,防止干 粉飞溅损失。用去离子水或缓冲液进行复溶,充分溶解后,稀释至合适浓度,小心移入比色皿中, 以去离子水或缓冲液为空白对照,测定样品在 280 nm 处的吸光值(建议吸光值控制在 0.1-1.5 区间 内),将其代入以下公式计算蛋白质浓度: C = N × A280nm E(0.1% at 280nm)式中:C:样品原液的蛋白质质量浓度(mg/mL) A280nm:蛋白质溶液在 280nm 处测得的吸光值 N:稀释倍数 E(0.1% at 280nm)1 mg/mL 蛋白质的消光系数 例如将本产品冻干粉充分溶解并混匀后,取适量原液稀释10倍,测得其在280 nm处的吸光值为0.966, 则原液的蛋白浓度为 10×0.966/3.22=3 mg/mL。 

注意事项: 

1. 链霉亲和素冻干粉易溶于水,溶解性可达 10 mg / mL 或更高; 

2. 建议使用纯水溶解; 

3. 如有未溶解物质,建议延长复溶时间。也可以通过离心或其他方式除去不溶物后,再用于后 续实验,不会对总蛋白产生很大的影响。 

4. 考虑到蛋白质特殊性,冻干粉建议现用现配,溶解后应避免反复冻融,如需多次使用,建议 按需分装后冻存(-20℃);避免在 4℃下长期存放。

 

重组链霉亲和素

 


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