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兔子白细胞介素6(IL-6)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
*部分 ELISA简介
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。自上世纪70年代初问世 以来,发展十分迅速,目前已被广泛用 于生物学和医学科学的许多领域。
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
第二部分 ELISA 的样本实验准备
在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本,及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。
液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
第三部分 ELISA试剂盒的检测目的和实验原理
1.检测目的
本试剂盒用于测定兔子血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素6(IL-6)含量。
2.实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔子白细胞介素6(IL-6)水平。用纯化 的兔子白细胞介素6(IL-6)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素6(IL-6),再与 HRP 标记的白细胞介素6(IL-6)抗 体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标 准曲线计算样品中兔子白细胞介素6(IL-6)浓度。
第四部分 试剂盒组成
试剂盒组成 | 48T | 96T | 保存 | |
说明书 | 1份 | 1份 |
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封板膜 | 2片(48) | 2片(96) |
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密封袋 | 1个 | 1个 |
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酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 | |
标准品(320ng/L) | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
浓缩洗涤液 | (30倍)20ml×1瓶 | (20倍)20ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
第五部分 操作步骤
160ng/L | 5 号标准品 | 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
80ng/L | 4 号标准品 | 150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
40ng/L | 3 号标准品 | 150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
20ng/L | 2 号标准品 | 150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
10ng/L | 1 号标准品 | 150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
15 分钟.
第六部分 计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。
(此图仅供参考)
第七部分 注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值 大于标准品孔*孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计 算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
第八部分检测范围
5ng/L - 160ng/L
第九部分保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6 个月
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