谷氨酰胺酶（ GLS） 活性测定试剂盒说明书

上海金沙4066总区生物供应：谷氨酰胺酶( GLS) 活性测定试剂盒！

谷氨酰胺酶(glutaminase, GLS) 活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和
氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
测定原理：
GLS 催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶
活性。
需自备仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、冰和蒸
馏水。
试剂组成和配制：
试剂一×1 瓶，60 mL，4 ℃保存；
试剂二×1 瓶，20 mL，4 ℃保存；
试剂三×1 瓶，30 mL，常温保存；
试剂四×1 瓶，10 mL，常温保存；
试剂五×1 瓶，6 mL，常温保存；
试剂六×1瓶，6 mL，常温避光保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 试
剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，
加入1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。
2、样品测定（在EP 中加入下列试剂）：
试剂名称（uL） 测定管 对照管
样本 25
蒸馏水 25
试剂一 100 100
试剂二 400 400
混匀，37℃水浴1 小时
试剂三 525 525
混匀，8000 g，25℃离心10 min；取上清液，在EP 管中加入下列试剂
上清液 650 650
试剂四 150 150
试剂五 100 100
试剂六 100 100
混匀，420nm 处读取吸光值A，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管
计算：
1、血清（浆）GLS 活性
单位定义：每mL 血清（浆）每小时催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定义为一个酶活力单位。
GLS（μmol /min/mL）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷T=363.1×(ΔA -0.1301)
2、组织、细菌或细胞GLS 活性
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg 蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定义为一个酶活力单位。
GLS（μmol /min /mg prot）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr÷T=363.1×(ΔA -0.1301)÷Cpr。
（2）按样本鲜重计算：
单位定义：每g 组织每小时催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定义为一个酶活力单位。
GLS（μmol /min /g 鲜重）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(W÷V 样总) ÷T=363.1×(ΔA -0.1301)÷W。
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1 万个细菌或细胞每小时催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定义为一个酶活力单位。
GLS（μmol /min /104 cell）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(500÷V 样总)÷T =0.7262×(ΔA -0.1301)
V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：
样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。