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谷胺酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）试剂盒说明书
咨询谷胺酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）试剂盒欢迎上海金沙4066总区生物。
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨
酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储
存和运输形式。
测定原理
GS 在ATP 和Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─
谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在540nm 处有zui大吸
收峰，可用分光光度计测定。
所需的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸
馏水。
试剂的组成和配制
提取液：30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：12mL×1 瓶，-20℃保存，如有沉淀，静置10min，取上清待用。
试剂二：12mL×1 瓶，-20℃保存，如有沉淀，静置10min，取上清待用。
试剂三：粉剂×2 瓶，-20℃保存。用时每瓶加入5mL 蒸馏水充分溶解待用。
试剂四：15mL×1 瓶，4℃保存。
样本测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，
加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、 在EP 管中加入下列试剂：
试剂名称（μL） 测定管 对照管
试剂一 400
试剂二 400
试剂三 175 175
样本 175 175
混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）准确水浴30min
试剂四 250 250
混匀，静置10min 后，5000g，25℃离心10min，取上清液测定540nm 处的吸光值A。△A=A
测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。
GS 活力单位的计算
1、血清（浆）GS 活性
单位定义：每mL 血清（浆）在每mL 反应体系中每min 使540 下吸光值变化0.01 定义为
一个酶活力单位。
计算公式：
GS（U/mL）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T =19×ΔA
2、组织、细菌或细胞GS 活性
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定义
为一个酶活力单位。
GS（U/mg prot）＝ΔA×V 反总÷（Cpr×V 样）÷0.01÷T =19×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定义为一个
酶活力单位。
GS（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =19×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1 万个细菌或细胞在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定
义为一个酶活力单位。
GS（U/104 cell）＝ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T =0.038×ΔA
V 反总：反应体系总体积，0.8mL； V 样：加入样本体积，0.14mL；V 样总：加入提取液
体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；
500：细菌或细胞总数，500 万。
