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人外周血白细胞分离液试剂盒说明书

发布时间:2018/3/15 点击量:1108

人外周血白细胞分离液试剂盒说明书

规格:200 mL/kit

保存:本产品对光敏感,应该室温避光储存,保质期 2 年。无菌开封后,保存于室温。

试剂盒组成:
各种动物外周血白细胞分离液 200mL
细胞洗涤液 200mL
红细胞裂解液 100mL

操作步骤:
1. 取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液。

2. 在离心管中加入适量分离液(血液体积小于5mL时,加入5mL分离液;大于等于5mL,加入等体
积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果),将血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后将血液小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。如果样品较多,加样的时间较长,在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。)

3. 室温,水平转子500~1000g,离心20~30min(血液的体积越大所
需的离心力越大,离心时间越长,zuijia的分离条件需摸索,离心转
速zui大不超过1200g)。
4. 离心后将出现明显的分层:zui上层是稀释的血浆层;血浆与分离液之间是淋巴细胞层;分离液中为粒细胞层(个体差异或者是分离条件不同,粒细胞层可能分离不明显);zui下层为红细层。

5. 小心的吸取淋巴细胞层及分离液层细胞到15mL洁净的离心管中,10mL PBS或细胞洗涤液洗涤细胞。250g,离心10min(如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液)

6. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。

7. 重复步骤6

8. 弃上清,细胞重悬备用。

注意事项:

A. 开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免
微生物污染。。

B. 分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是
温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。

C. 血液样本为新鲜抗凝血(采血2 h以内),为保持淋巴细胞的活性,应避免冷冻和冷藏。

D. 血液样本不需稀释,直接进行分离即可。

E. 稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集大大降低细胞得率及纯度

人外周血白细胞分离液试剂盒说明书


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