β-木糖苷酶测定试剂盒说明书

β-木糖苷酶测定试剂盒说明书

产品内容：
提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体2mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体35mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体35mL×1 瓶，4℃保存。
标准液：液体1ml×1支，4℃保存，10mol/ml对硝基苯酚溶液。

产品说明：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关
键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造
纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm 处有特征吸收峰，
测定405nm 光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

一、粗酶液提取
1. 植物样本：称取约0.1g 样品，加1.0 mL 提取液充分冰浴匀浆，然后12000rpm，4℃，离心20min，
弃沉淀，取20μL 上清测定蛋白含量，剩余上清作为待测酶液。
2. 细菌、真菌样本：收集约500 万个细胞，加入1.0 mL 提取液，超声波破碎（冰浴，功率300w，
超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，弃沉淀，取20μL 上
清测定蛋白含量，剩余上清置于冰上待测。
3. 标准液的处理：用试剂二将标准液稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0 mol/ml。

注意事项：
1、吸光度变化应该控制在0.05-0.6 之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算
的稀释倍数要相应改变。
2、样品蛋白质含量需要另外测定，可选用考马斯亮蓝法蛋白含量测定试剂盒进行测定。