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ELISA 的样本实验准备
在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本,及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。
液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
第三部分 ELISA试剂盒的检测目的和实验原理
1.检测目的
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc) 含量。
2.实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc) 水平。用纯化的小鼠P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc) ,再与HRP标记的P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc) 抗 体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标 准曲线计算样品中小鼠P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc) 浓度。
第四部分 试剂盒组成
试剂盒组成 | 48T | 96T | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 |
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封板膜 | 2片(48) | 2片(96) |
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密封袋 | 1个 | 1个 |
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酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品(400 ng/L) | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | (20倍)20ml×1瓶 | (30倍)20ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
第五部分 操作步骤
200 ng/L | 5 号标准品 | 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
100 ng/L | 4 号标准品 | 150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
50 ng/L | 3 号标准品 | 150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
25 ng/L | 2 号标准品 | 150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
12.5 ng/L | 1 号标准品 | 150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 |
重复 5 次,拍干。
10 分钟.
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