通用RT-PCR 试剂盒（M-MLV）说明书

通用RT-PCR 试剂盒(M-MLV)

规格：25T/50T/100T

保存：-20℃保存，避免反复冻融，复检期为1 年。

说明书1 份1 份1 份

产品简介：
本试剂盒适用于各种RNA 制品的反转录反应以及随后的PCR 扩增。它采用M-MLV 进行反转录反应，能够
获得较长的反转录产物。同时，在20ul 反转录体系和50ul PCR 反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR 产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT 酶采用进口的M-MLV，所以cDNA 更长，基因的信息保留得更完整！
反转录过程中特异的RNase 抑制剂可有效降低由于外源RNase 污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA 克隆及目的基因检测等分子生物学实验。

操作步骤：
一、反转录反应

1、在冰浴的无RNase 的离心管中加入如下反应成分：
1-5ug 总RNA 或50-500ng mRNA
2ul Oligo(dT)16 或2 pmole 基因特异性引物
补RNase-free ddH2O 至14.5ul

2、70℃保温5min 后迅速在冰上冷却2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：
4ul 5×M-MLV Buffer
1ul dNTPs
0.5ul RNasin
1ul M-MLV

3、42℃温浴60min，如果是用随机引物，请先将离心管置25℃温浴10min，再42℃温浴60min。

4、95℃加热5min 终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。

5、用RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到50ul，取2-5ul 进行PCR 反应。

二、PCR 反应

1、按以下各组分配制50ul PCR 反应体系：
10×PCR Buffer 5ul
dNTPs 1ul
上游引物（用户自备10um） 1ul
下游引物（用户自备10um） 1ul
RT 反应产物2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul

2、混匀后短暂离心，PCR 仪扩增，琼脂糖凝胶电泳观察结果。

注意事项：

1、用于cDNA 合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压
灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。

2、试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期12 个月。

3、RNA 样品要避免反复多次冻融，应使RNA 在冰浴中处于融化状态。