超氧阴离子清除能力试剂盒说明书

超氧阴离子清除能力试剂盒说明书

规格:100T/96S

产品内容:
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体1mL×1支，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加4mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂五：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。

产品说明:
超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋
白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和
病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。
AP-TEMED系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－与对氨基苯磺酸和α－萘
胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm
的吸光值呈负相关。
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

操作步骤:
一、样品处理
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）
加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入
1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，
10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体：直接检测。
4. 粉剂药物可配制成相同浓度，比如1mg/mL。

三、计算公式
超氧阴离子清除率I%= （A 对照管-A 测定管）/ A 对照管×100%

注意事项：
1. 试剂一4℃可保存2 个月，配制好的试剂二4℃可保存一周，建议实验前配制，并尽快使用。
2. 样品处理完后立即进行测定，或者低温保存不超过24 小时