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羊钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书

发布时间:2018/6/13 点击量:1525

检测范围:                                                          96T
18 U/L -750 U/L

使用目的:
本试剂盒用于测定羊血清,血浆及相关液体样本中钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)活性。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中羊钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)水平。用纯化的羊钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入钙激活中性蛋白酶1(CAPN1),再与HRP标记的钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中羊钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)活性浓度。 
试剂盒组成 
1    30倍浓缩洗涤液    20ml×1瓶    7    终止液    6ml×1瓶
2    酶标试剂    6ml×1瓶    8    标准品(1200U/L)    0.5ml×1瓶
3    酶标包被板    12孔×8条    9    标准品稀释液    1.5ml×1瓶
4    样品稀释液    6ml×1瓶    10    说明书    1份
5    显色剂A液    6ml×1瓶    11    封板膜    2张  
6    显色剂B液    6ml×1/瓶    12    密封袋    1个
标本要求 
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
600 U/L    5号标准品    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
300 U/L    4号标准品    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
150 U/L    3号标准品    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
75U/L    2号标准品    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
37.5U/L    1号标准品    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液


2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间hao控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,hao做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。


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