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溴化氰活化4B琼脂糖凝胶产品说明书

发布时间:2018/7/9 点击量:2989

溴化氰活化4B/6B琼脂糖凝胶是一种活化中间体填料,它是通过溴化氰和琼脂糖上面的羟基反应生成活化的氰酸酯基团。蛋白质、多肽、氨基酸等可以偶联到溴化氰活化4B/6B琼脂糖凝胶上。

它具有以下优点:

偶联条件温和,效率高;可偶联含有氨基的配体,应用范围广。

产品指标

产品牌号

溴化氰活化4B琼脂糖凝胶

溴化氰活化6B琼脂糖凝胶

基质

seplite 4B

seplite 6B

颗粒大小

平均粒径90μm(50-160μm)

偶联能力

20~60mgα-胰凝乳蛋白酶原/ml凝胶

大线性流量

75cm/h(25℃),直径1.6cm色谱柱,5cm柱床高

高温高压

不耐受

pH稳定性

2–11

化学稳定性

常见溶液中可以保持稳定。可以耐受非离子型去污剂、变性溶剂,如8 M尿素和6 M盐酸胍。也可以耐受50%二甲基甲酰胺和50%二氧六环等有机溶剂。

保存

冻干粉,2~8℃,干燥

 

使用注意事项:
    溴化氰活化4B/6B琼脂糖凝胶是以添加剂的形式冻干处理得到的。这些添加剂在填料螯合所需的配体前必须在低pH(pH 2–3)条件下进行清洗。活化后的活性基团也应该使用低pH值(pH值2–3)保存,而在高pH值则会出现降解。
    称取所需量的冻干粉(1 g冻干粉可获得3~5ml终体积的填料),使用1mM HCl溶胀。填料会很快膨胀,再用1mM HCl在玻璃砂芯漏斗(G3)中进行清洗15min。每克冻干粉添加约200ml 1mM的HCl溶胀,实际可以分次添加。
 

一般配体偶联的过程如下:
(1)将所需要偶联的配基溶解到 pH 8.3含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/LNaHCO3 缓冲溶液中,加入溶胀好的溴化氰活化4B/6B琼脂糖凝胶。
(2)在室温中搅拌反应2~4小时或者在4℃下过夜反应。
(3)反应*后,用5倍反应体积的偶联缓冲液洗涤掉其中多余的配体,10倍体积的水洗。
(4)将反应完洗涤过的凝胶悬浮到水中,加入乙醇胺(1mol/L)或者pH8.0的Tris-HCl缓冲液,在常温少搅拌反应2小时,以消除残余活性基团。
(5)用含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/L醋酸盐缓冲液(PH 4.0)和含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/L Tris-HCl缓冲液(PH 8)交替洗涤,至少重复以上循环洗涤3次。用10倍柱体积的PBS洗涤。

 


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