猪活化蛋白 C（APC）酶联免疫分析

猪活化蛋白 C（APC）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
猪活化蛋白 C（APC）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
部分 ELISA 简介
ELISA 是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。自上
世纪 70 年代初问世 以来，发展十分迅速，目前已被广泛用 于生物学和医学科学的许多领
域。
ELISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原
或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗
涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗
原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一
定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质
的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地
放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。
第二部分 ELISA 的样本实验准备
在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后
当天就进行检测的样本，及时储存在 4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-
20℃备用，有条件的，-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。
液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集
上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离
心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再
次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/
分）。仔细收集上清。
5. 培养细胞：检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100
万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再
次离心。
6. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试
剂，用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上
清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
7. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进
行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
8. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。