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构建携带ACE2基因的慢病毒表达载体,观察其感染人脐静脉内皮细胞后ACE2表达增加对血管紧张素2诱导人脐静脉内皮细胞增殖活性降低与凋亡增加的影响,初步探讨该影响的机制。
方法1.采用PCR技术从含有ACE2基因的质粒克隆模板pc-DNA3.1-hygro(+)-mACE2上钓取ACE2基因,并将ACE2基因重组到慢病毒载体表达质粒pGC-FU中,构建重组慢病毒载体表达质粒pGC-FU-ACE2,通过酶切、测序验证ACE2基因后,将pGC-FU-ACE2质粒和包装质粒pHelper1.0,pHelper2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带ACE2基因的重组慢病毒(Lentiviral-ACE2)。
2.以感染复数为10(MOI=10)感染人脐静脉内皮细胞,感染72小时后通过RT-PCR,Western-blot检测各组细胞ACE2基因的转录和蛋白表达水平
3.利用上海金沙4066总区的人血管紧张素2ELISA试剂盒检测ANG 2的浓度,初步探讨ACE2发挥上述作用的机制。
降低:见于原发性醛固酮增多症、晚期肾功能衰竭等。
升高:见于原发性高血压及其他类型的高血压,分泌肾素的肾球旁器增生症或肿瘤。