ELISA实验中标本因素对于实验结果的影响

 ELISA实验中标本因素对于实验结果的影响

　　以辣根过氧化物酶（HRP）为标记的ELISA测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性；混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净；如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；标本凝固不全，在研究试验中，有时为了争取时间而快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；采血试管洗涤不*、反复使用易交叉污染；塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。 

　　因此血清标本宜在新鲜时检测，禁用严重溶血的标本。一般说来，在5 d内测定的血清标本可放置于2～8℃，标本在冰箱中保存时间过长易导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深。超过1周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。

反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存做多次检测，宜少量分装冰存；使用一次性玻璃试管或真空采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷，能吸附酶标记物，不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性；血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶或一次性真空促凝采血管。 

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