上海金沙4066总区为大家详述关于ELISA试剂盒的构成以及测定步骤

ELISA试剂盒拥有稳定的重复性和可靠，是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。下面以96T的为例来给大家介绍关于ELISA试剂盒的构成以及测定步骤：

　　试剂盒组成

　完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：

　　(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);

　　(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);

　　(3)酶的底物;

　　(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中);

　　(5)结合物及标本的稀释液;

　　(6)洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;

　　(7)酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的zui终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

 测定步骤                            
1.加样                            
    1. 除包被外都需45度加样                        
    2.加样体积要准确                        
    3.管底加样，不能加在管壁上                        
    4.加样时不能产生气泡                        
2.温浴                            
    1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。                        
    2.各ELISA板不应叠在一起。                        
    3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。                        
    4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。                        
3.洗涤                            
    1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。                        
    2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。                        
4.读板                            
    1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。                        
    2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。

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