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实验以人脂肪间充质干细胞作为基因转染的靶细胞，构建VEGF165重组腺病毒载体，利用重组腺病毒载体将其携带导入ADSCs中，检测外源基因在ADSCs中的及转染后细胞生物特性的变化。旨在通过基因转染这一途径将VEGF165与ADSCs结合起来，从而为探索一种更加有效的构建组织工程化脂肪的方法，提供实验基础.
目的：1、从人脂肪组织提取脂肪间充质干细胞，了解其生物学特性；2构建VEGF165腺病毒载体；3、以EGFP作为报告基因，筛选腺病毒*感染复数，为进一步进行携带外源基因的转染探索转染条件；4、研究携带人VEGF165腺病毒载体转染脂肪间充质干细胞后，外源基因的表达情况；5、研究ADSCs在基因转染前后细胞活性与增殖能力的变化，为下一步进行体内回植提供研究基础。
方法：1.采用胶原酶消化贴壁法提取人脂肪间充质干细胞，并传代培养以流式细胞术鉴定其表面标志，测定培养细胞的生长曲线。2.采用Ad5重组腺病毒载体以不同梯度的MOI(Multiplicity of Infection)值转染人脂肪间充质干细胞，以EGFP作为报告基因，荧光倒置显微镜观察并用图像分析法测定转染效率，筛选确定*转染值。3.体外培养并扩增人脂肪间充质干细胞，试验组用构建好的AD5-VEGF165-IRES-EGFP进行基因转染，对照组只加入培养液。收集各组第1、3、5、7、9、至19天的上清液，采用ELISA试剂盒测定培养上清液中VEGF165的浓度，各组进行比较。4.实验组：用AD5-VEGF165-IRES-EGFP进行基因转染，阳性对照组：用AD5-EGFP空载体进行转染；阴性对照组只加入培养液。用MTT法检测各组细胞的活性，以流式细胞术检测各组细胞的增殖活性、细胞周期。所有数据进行统计学分析。
结果：1.胶原酶消化法是一种有效、方便、快捷的ADSCs分离方法，所分离的细胞能传十代以上，具有干细胞特性，ADSCs的特异性标志阳性，不表达造血干细胞的特异性标志；流式细胞术结果CD106阴性，而CD49d阳性。2、重组腺病毒载体具有较高的转染效率，当转染复数(MOI)值为400，转染效率可达90％以上。3.ELISA法检测培养细胞上清液中VEGF165，转染组可见VGEF165高表达(3312.157±170.378)，空白对照组检测到微量VEGF165表达：转染组和未转染组间显示显著性差异(P<0.05)。4.经VEGF165基因转染的ADSCs和转染空载体组及未转染组吸光度值无显著性差异(P>0.05)。经基因转染的ADSCs与转染空载体、未转染的ADSCs相比较，G1期细胞所占百分比无显著性差异，反映增殖活力的增殖指数Pr1(包括G1/G2期和M期)也无显著性差异(P>0.05)；携带外源基因腺病毒转染对细胞的活性与增殖周期无显著影响。
结论： 1.人脂肪组织中存在具有多向分化潜能的干细胞，且含量丰富，生物学性能稳定。胶原酶消化法可以得到相对较纯的问充质干细胞。 2.重组腺病毒载体是转染人脂肪间充质干细胞的较理想载体，恰当的MOI值可提高转染效率。 3.重组腺病毒载体可成功地将VEGF基因转染入人ADSCs细胞中，hADSCs可以在体外持续稳定的表达目的蛋白；腺病毒转染未影响ADSCs的细胞活性和细胞增殖周期。从而可以将促血管生长因子治疗和干细胞移植有效的结合起来。
