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高迁移率族蛋白B1对大鼠脾脏树突状细胞免疫功能影响及机制研究
高迁移率族蛋白B1(HMGB1)作为一种晚期炎症介质，介导了脓毒症和其他系统性炎症的致死性效应，研究其病理生理作用将有助于深化对脓毒症发病机制的认识，并为免疫反应的调控提供潜在的干预目标。本试验拟应用HMGB1体外刺激大鼠脾脏树突状细胞(DC)，阐明HMGB1对DC免疫功能的影响并对其机制进行初步探讨，旨在为脓毒症及多器官功能障碍综合征的预防和治疗提供新思路。 方法：分离正常Wistar大鼠脾脏DC，在含10％小牛血清的1640培养液中调整细胞浓度1×10<'6>/孔后置于24孔培养板。实验一：采用HMGB1刺激，观察HMGB1刺激与DC表面共刺激分子CD80、CD86和主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ表达、细胞因子白介素(IL)-12、肿瘤坏死因子(TNF)-α基因表达和蛋白合成的时间-效应关系及剂量-效应关系。实验二：HMGB1刺激后，采用激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞术检测DC表面晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达强度。同时观察抗RAGE抗体对HMGB1刺激后DC表面共刺激分子CD80、CD86和MHC Ⅱ表达的影响。实验三：采用1μg/ml的HMGB1刺激48小时(h)，DC与脾T淋巴细胞的细胞比例分别为1：50、1：100、1：150、1：200混合，于共同作用后3天、5天观察T淋巴细胞增殖反应、功能性极化、IL-2、白介素-2受体(IL-2R)基因/蛋白表达及核因子(NF)-кB活性的情况。 结论： 1．HMGB1能诱导DC表面共刺激分子表达增强和IL-12、TNF-α的合成、释放，HMGB1可能是诱导DC成熟的重要免疫刺激信号。 2．HMGB1能上调DC受体RAGE表达，RAGE可能是参与HMGB1诱导DC成熟分化的主要受体之一。 3．HMGB1诱导的DC使脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应明显增强，并促进T淋巴细胞向Th1功能性极化。 4．初步明确了HMGB1诱导的DC影响脾T淋巴细胞IL-2生成和IL-2R表达的相关信号转导通路。
