上海金沙4066总区生物：酶免试剂盒（ELISA试剂盒）的反应原理

我们采用的酶：

辣根过氧化酶（HRP）

1. HRP在蔬菜作物辣根中含量很高。

2. 是一种糖蛋白，含糖量约18％；分子量为44kD。

3. 是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合 而成的一种卟啉蛋白质。

4. 主酶为无色糖蛋白，在275nm波长处有zui高吸收峰；辅基是深 棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有zui高吸收峰。

HRP催化下列反应：

DH2+H2O2<==HRP==>D+2H2O

上式中DH2为供氢体，H2O2为受氢体。HRP对受氢体的专一 性很高，除H2O2外，仅作用于小分子醇的过氧化物和尿素的过 氧化物。后者为固体，作为试剂较H2O2方便。许多化合物可作 为HRP的供氢体，在ELISA中常用的供氢体底物为邻苯二胺（orthopenylenediamine，OPD）、四甲基联苯胺（3，3'， 5，5'-tetramethylbenzidine，TMB）和ABTS[2，2'-azino- bis(3-ethyl-benzthiazolinesulfonate-6)]。